多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片，如恒冷箱切片、甲醇制冷器制冷箱切片、二氧化碳冰冻法切片、半导体制冷冰冻切片等。

　　如果标本很脆弱或者有树枝状突起（当切片后投入水中时，常常引起分散，甚至发生丢失；如果间隙较多，还会因发生散乱而失去相互间的联系造成移位）则可以尝试明胶冰冻切片法。

　　小B的使命是为了了解淋巴结内是否有转移的淋巴细胞或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者采取其他的治疗措施；

　　A:“取材的时候我们会尽量保持刀具与台面的干燥，避免标本与水接触，即使标本中含有水或者血性液体，我们也会用干燥的纱布或者滤纸把水吸干，这样可以提高切片的质量从而防止空洞、冰晶等现象的出现。”

　　D:“此外，还会考虑标本结构的方向性以及标本切片的方向性，如肾标本的取材，标本的截面会包括肾背膜、肾皮质、肾髓质3种结构。若您没有立刻切片的要求，我们则可以先清理然后快速放入液氮保存。”

　　“快速冷冻可以有效降低冰晶的形成。新鲜的组织要快速冷冻，一般情况下，较硬组织如子宫肌瘤要冷冻1-2分钟，软组织以及细胞丰富的组织如肝、脾和淋巴结等需要2-4分钟，脂肪组织需要5-6分钟，脂肪组织的切片厚度要达到8-10 um才更有利于观察。”

　　“现常用的冰冻包埋液是由高分子聚合物组成的透明粘稠液体，速冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近，因此能保证最佳的组织细胞形态，并具有支持填充、减少皱褶和断裂的作用，能切出2-3微米的超薄切片。这个您可以放心。”

　　“温度过低、过高会导致组织块过硬或者硬度不够，从而影响切片质量，产生搓板状、梯田状、厚薄不均、破碎及粉末状现象。根据不同组织的形态和组成成分的不同，未固定的组织合适的对应温度大致如下：乳腺、卵巢、子宫等：-20 ~-25℃；胃肠等：-18~-20℃；甲状腺、肝、肾、脾等：-15℃左右；脂肪组织一般在-35℃以下。固定好的组织合适的温度一般为-12~-17℃。”

　　“切片时会提前将锋利的刀片调节合适的角度安在刀架上，会保证切片刀在适宜的温度下，以防止切片粘连。用力会均匀、柔和，也会防止污染及切片皱褶，尽量切到组织最大面，为了切到病理部位，必要时可能要连续切片，然后用刷子辅助展开切片，沾在载玻片上。片子沾好后，就立刻将它浸没于固定液中。固定液种类很多，常用的有冰丙酮、多聚甲醛、环保组织固定液等。如果组织固定延迟会出现风干的假象，当组织片粘在有温度的玻片上时就会出现明显的风干假象，表现为核的细节丢失及胞浆液的溢出。我想这一点您也需要了解并做好心理准备。”

　　一般情况推荐切6um厚，这种厚度使染色更加饱满，层次清晰，6um的片子可以有更多的时间去避免风干假象，也会减少冰晶所造成的细胞核空洞。特殊情况下可能需要更厚或更薄的片子。

　　（2）组织片的周长与面积比过大，像细条形的组织容易受染色缸内液体涡旋应力的影响而脱落，同样包括薄的纤维囊肿及不规则的坏死组织，太厚的组织也不例外；

　　（5）组织内含过多的坏死组织，组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分溢出，坏死组织失去支撑作用，染色时容易脱落；

　　含水量特别多的组织冷冻时会出现肥皂泡样的空隙，主要是因为组织中的水分凝固时形成球形的冰晶，挤压纤维组织条而产生泡沫样的形状。组织片在进一步处理时泡沫样的水分又重新分布于间质，而未曾冷冻的组织显示出间质的水肿。这些水分巨多的组织在切片时很难保证不裂开，应尽可能提高切片的温度。

　　组织在冰冻时候的变化与水结冰膨胀是密切相关的，细胞实性的组织会受到冰泡膨胀的挤压，这在水肿组织非常明显。有些组织细胞浆内会出现一些空泡，也是冰冻假象的一种。